人磷脂酶B(PLB) elisa試劑盒基于雙抗體夾心法的原理進行測定。其包括固相免疫酶標法和顏色反應法。試劑盒中已經預包被了特異性抗PLB抗體的微孔板。操作時,待測樣本和標準品與孔板中的抗PLB抗體發生特異性結合,在洗滌后加入辣根過氧化物酶標記的二抗,形成夾心免疫復合物。再次洗滌后,加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基聯苯二胺)進行發色反應。酶反應停止后,通過比色測定標準品和待測樣品的吸光度,并根據標準曲線計算出待測樣品中PLB的含量。
1.樣品處理:將待測樣品預處理,如血清、血漿或細胞上清。將樣品離心去除沉淀,獲取上清液。
2.樣品稀釋:根據預先實驗確定的稀釋倍數,將待測樣品和標準品依次稀釋到不同濃度。
3.加樣:將稀釋好的標準品和待測樣品加入微孔板中,每個樣品設置重復孔位。
4.孵育:在室溫下孵育一段時間,使樣品中的PLB與孔板中的抗PLB抗體發生特異性結合。
5.洗滌:將孔板倒置,使用洗滌緩沖液洗滌孔位,去除未結合的物質。
6.加標記抗體:加入辣根過氧化物酶標記的二抗,與夾心免疫復合物結合。
7.洗滌:同樣使用洗滌緩沖液洗滌孔位,去除未結合的物質。
8.底物反應:加入底物TMB,與酶標記的二抗發生反應,在光束下形成藍色溶液。
9.反應停止:加入停止液終止底物反應,使溶液變為黃色。
10.測定吸光度:使用ELISA分析儀測定各孔位的吸光度值,一般在450nm波長下進行測定。
人磷脂酶B(PLB) elisa試劑盒應用領域:
1.心肌疾病研究:PLB是調節心肌細胞收縮和舒張的重要蛋白,其異常表達與心肌疾病的發生和發展密切相關。ELISA試劑盒可以定量檢測PLB的含量,揭示心肌疾病的發病機制。
2.藥物篩選:人PLBELISA試劑盒可以用于藥物對PLB的影響研究。通過評估藥物對PLB表達水平的影響,篩選出對心臟功能有益的藥物。
3.臨床診斷:人PLBELISA試劑盒可以用于臨床上檢測PLB的含量,評估心肌功能和狀況??勺鳛橐环N輔助手段,在心血管疾病的早期診斷和治療中提供參考。